Особенности патоморфологических изменений в органах и тканях при меланоме у кошек

Муниципальное бюджетное образовательное учреждение

Лицей № 113 города Новосибирска

Секция: зоология

Тема: Особенности патоморфологических изменений в органах и тканях при меланоме у кошек

Подоскина Софья Евгеньевна

обучающаяся 10 класса «А»

МБОУ Лицей № 113

телефон: 8951-368-81-95

г. Новосибирск

Руководитель:

Ухлова Александра Владимировна

старший преподаватель

кафедры фармакологии

и общей патологии

Консультант:

Вышинская Нина Ивановна,

учитель биологии высшей квалификационной категории

Новосибирск, 2021

Содержание

Введение…………………………………………………………….3

I. Теоретическая часть. Обзор литературы…………………………..4

II. Практическая часть. Методика исследования……………..……..6

2.1 Место проведения вскрытия (секционный зал)……………...6

2.2 Особенности вскрытия мелких животных…….......................6

2.3 Цитология. Техника цитологии……………………………….7

III. Результаты исследования…………………...…………….............10

3.1 Патоморфологические изменения в органах и тканях при меланом…………………………………………..............................10

3.2 Результаты цитологического исследования мазка - отпечатка и соскоба при меланоме……………………………………………...…….….10

IV. Выводы………………………………………….….........................11

V. Список источников информации…………………..……………...12

Приложения…………………………………………………….......13

Введение

Проблемы злокачественных изменений в организме представляют большой интерес как с биологической, так и с медицинской точки зрения. От злокачественных новообразований в мире ежегодно умирает около 6 млн. человек. Растет количество спонтанных опухолей и у мелких домашних животных. Мне эта тема интересна тем, что по сравнению с другими животными злокачественные опухоли у собак и кошек встречаются значительно чаще, нередко оказываясь причиной их гибели или эвтаназии А ведь эти животные с древности одомашнены человеком и сопровождают его в течение длительного времени.

Актуальность темы. Изучение спонтанных новообразований у собак и кошек имеет большое значение для сравнительной онкологии, так как эти животные непосредственно контактируют с человеком и подвергаются воздействию одних и тех же факторов окружающей среды. Изучение этих заболеваний у животных поможет более эффективно распознавать и лечить их у человека.

К числу важнейших медицинских вопросов онкологии относится установление возможной связи между заболеваемостью лейкозами и опухолями животных и человека.

Цель исследовательской работы: Узнать об особенностях патоморфологических изменений в органах и тканях при меланоме у кошек.

Задачи исследовательской работы:

Изучить литературу по данному вопросу.

Изучить и проанализировать особенности патоморфологических изменений в органах и тканях.

Методы исследования:

теоретический анализ литературы по проблемам исследования;

посмертное патологоанатомическое исследование;

обработка полученных данных.

Объект исследования – труп животного.

Предмет исследования – меланома у кошек.

Теоретическая и практическая значимость данной работы заключается в том, что ее результаты и основные положения могут быть использованы при изучении меланом у кошек в научной деятельности и в практике установления диагноза.

I. Теоретическая часть. Обзор литературы.

Меланома — разрушительное заболевание, которое часто встречается как в ветеринарии, так и в медицине человека. Молекулярные изменения, связанные с неопластической трансформацией меланоцитов, включают мутации в генах, которые кодируют белки, присущие регуляторным путям двух белков-супрессоров опухоли, мутации протоонкогена в онкогены, изменение экспрессии эпителиального кадгерина и молекул адгезии и активация ангиогенных факторов и других факторов роста. Вид рака, который в отличие от других, увеличивался за последние 50 лет, и, хотя он все еще составляет менее 5% всех кожных злокачественных новообразований, на меланому приходится большая часть смертей от рака кожи из-за ее склонности к метастазированию. Диагноз меланомы у домашних животных обычно имеет тяжелый прогноз. Это обнаруживается на поздней стадии, когда иссечение редко бывает излечивающим, а метастазы часто уже обнаруживаются в регионарных лимфатических узлах [1].

Этиология (причина возникновения) онкологических заболеваний изучена слабо, однако большинство специалистов утверждает, что основной причиной появления меланомы у кошек является сбой в производстве меланоцитов - клеток, отвечающих за пигментацию кожи животного.

Причины подобного сбоя на сегодняшний день еще не установлены. Однако любой ветеринар, занимающийся онкологическими заболеваниями, укажет на солидный возраст пациентов и принадлежность большинства пострадавших особей к представителям мелких пород. Наиболее вероятной причиной заболевания является врожденная склонность к возрастным изменениям в эндокринной системе животного.

Группа меланом, развивающихся на защищенной от солнца коже, включает акральную (ногтевые пластины) меланому, меланому половых органов и слизистых оболочек, меланому глаза и лептоменингеальную(мозга) меланому. Другими редкими подтипами меланомы, которые возникают независимо от воздействия УФ-излучения, являются меланома шпица, меланома, возникающая в синем невусе(родинке), и меланома, возникающая в врожденном невусе(родинке). Хотя все подтипы происходят из меланоцитов и, таким образом, имеют одинаковое эмбриональное происхождение и клеточную функцию, этиопатогенез и биологическое поведение этих подтипов меланомы очень разные, с различными ландшафтами генетических изменений и разными путями метастазирования [2].

У кошек меланома возникает чаще на коже, а также сосудистой оболочке глаза, причем клинически может выглядеть не специфично.

Злокачественные меланомы могут быть пигментированными или непигментированными (амеланотичными), могут быть изъязвлёнными и имеют тенденцию быть более крупными и более быстро расти, чем доброкачественные меланоцитомы [5].

При локализации опухоли в коже опухоль растет медленно, сохраняет подвижность и обладает относительно доброкачественным клиническим течением, поздно дает метастазы. При локализации на слизистой ротовой полости меланома быстро прорастает окружающие ткани, становится неподвижной и рано дает метастазы в подчелюстные и шейные лимфоузлы. Опухоль склонна к кровоточивости вследствие постоянного травмированния ее зубами и пищей [3].

Меланома характеризуется бурным и ранним метастазированием (от 2х месяцев и более). У нее два основных пути метастазирования ― через лимфоузлы, по лимфотическим сосудам и через кровь. Чаще всего поражаются лимфатические узлы, расположенные в непосредственной близости от опухоли. Встречаются метастазы в кожу. Они имеют вид множественных мелких, слегка возвышающих над уровнем кожи высыпаний коричневого или черного цвета. Метастазы, распространенные кровью, могут возникнуть в любом органе, но обычно поражаются легкие, печень, головной мозг и надпочечники [3].

Как было сказано ранее, меланома редко встречается у кошек, составляя менее 1% всех новообразований полости рта и примерно 0,5% опухолей кожи. Глазные и кожные формы обычно более распространены, чем меланома полости рта. Наиболее частые участки кожи - голова (рис.1), хвоста, дистальных отделов конечностей, и поясничной области. Прогноз обычно плохой из-за рецидивов и региональных метастазов почти в половине случаев.

Глазная меланома, как правило, возникает в переднем увеальном тракте, происходящем в радужной оболочке, при этом в одном исследовании сообщается о более 60% всех глазных меланоцитарных опухолей кошек на этом участке. Это обычно проявляется как очаговая диффузная гиперпигментация радужки, а не как дискретный узелок или образование. Глаукома - частое осложнение. Сообщалось также о меланоме, возникающей в лимбе, конъюнктиве и мигательной перепонке, хотя они очень редки. Харрис и Дубельциг (1999г) наблюдали атипичную форму внутриглазной меланомы кошек, которая возникает мультифокально в частях увеального тракта, кроме радужной оболочки, и имеет тенденцию поражать как глазное яблоко, так и склеру. Меланомы глаза могут быть узко инфильтративными или широко метастазировать. Некоторые авторы задокументировали медленную скорость роста с длительным латентным периодом между обнаружением первичной глазной опухоли и возникновением метастатического заболевания. Другие предполагают, что метастазы могут возникать на более ранних стадиях, хотя это может зависеть от времени постановки диагноза и метода лечения. Меланомы с метастатическим поведением также были описаны в области глазного дна, и, хотя в норме доброкачественные, в лимбе. В исследовании 34 кошек с диффузной меланомой радужки общее время выживания после энуклеации диффузной меланомы радужки было значительно сокращено по сравнению со здоровыми кошками и кошками с энуклеацией по другим причинам. 123 Кошки с заболеванием, ограниченным стромой радужки и трабекулярной сеткой (раннее заболевание), имели время выживания, сравнимое с контрольной группой, но время выживания сокращалось при инвазии в цилиарное тело (умеренное заболевание) и было еще короче при запущенном заболевании.

Возрастной диапазон сопоставим в нескольких исследованиях, затрагивающих кошек от 2 до 18 лет, но достигая пика в 8–12 лет.

II. Практическая часть. Методика исследования

2.1 Место проведения вскрытия (секционный зал) НГАУ

Объект исследования: труп животного(кот)

Предмет исследования: меланома у кота.

Патологоанатомическое вскрытие трупов животных проводят в специально оборудованных помещениях (секционных залах или прозекториях), которые имеются при ветеринарных институтах и лабораториях, лечебницах и заводах по производству мясокостной муки.

Если специальных помещений нет, вскрытие производят на скотомогильниках, на специальных площадках и в помещениях, расположенных возле биотермических ям, в которых трупы затем утилизируют. В этих помещениях полы должны быть бетонированными или асфальтированными, под полом делается закрываемый крышкой люк для сброса частей расчлененного трупа в биотермическую яму. Выбор места и устройство их определяет специальная комиссия, состоящая из представителей федеральных исполнительных органов и ветеринарно–санитарного надзора. При вскрытии трупов животных в полевой обстановке создают условия для безопасной работы.

Секционные помещения должны быть просторными и светлыми, легко вентилируемыми, иметь водопровод с горячей и холодной водой и канализацию. Отношение площади окон к полу 1:4 – 1:5. Вытяжная вентиляция должна быть рассчитана на полную замену воздуха в помещении за 1ч. Стены и потолок покрывают легко моющимся, водонепроницаемым материалом (кафель, масляная краска и др.). Пол выстилают асфальтом, цементом. Он должен иметь необходимый уклон для стока воды, специальный резервуар для обезвреживания ее хлорной известью и др. В общую канализационную систему вода поступает после обезвреживания.

В секционном помещении имеются прочные и устойчивые столы для вскрытия трупов животных, шкафы для хранения спецодежды, инструментов, посуды, реактивов и патматериала, столы для инструментов и ведения записей, умывальник с дезинфицирующими растворами, электроплитка, автоклав и др.[6]

Посмертное патологоанатомическое исследование моего проекта будет проводиться в прозектории НГАУ.

2.2. Особенности вскрытия мелких животных

В патологической анатомии используют следующие материалы и методы исследования: вскрытие трупов, патоморфологическое исследование внутренних органов животных, методы биопсии и экспериментальный.

Вскрытие трупов – основной метод исследования. Во время вскрытия устанавливают изменения, свойственные той или иной болезни, ее течение, причину смерти, эффективность лечения, выясняют ошибки диагностики и лечения. Вскрытие важно и в отношении санитарных, эпизоотологических мероприятий. Патоморфологическое исследование туш и органов вынужденно убитых животных имеет большое значение для диагностики и ветеринарно–санитарной оценки туш и органов.

При организации и проведении патологоанатомического исследования трупа животного придерживаются определенного порядка и последовательности в работе:

регистрация, сбор анамнестических данных об условиях жизни, история болезни и обстоятельства смерти животного;

2)наружный осмотр;

3) внутренний осмотр.[6]

При вскрытии трупов мелких животных (свиней, котов, овец, собак и др.) все органы удаляют единым органокомплексом без нарушения естественной связи между ними:

1. Труп вскрывают в спинном положении. Сначала подрезают задние конечности в тазобедренных суставах, передние отделяют от грудной клетки до лопаточных хрящей. Брюшную стенку разрезают по средней линии от мечевидного хряща грудной кости до лонного сращения тазовых костей и делают два дополнительных поперечных разреза. Брюшную стенку можно удалять и круговым разрезом вдоль ребер и позвоночника.

2. Определяют положение органов брюшной полости, постороннее содержимое в ней, состояние пристеночной и висцеральной брюшины, сальника и брыжейки.

3. Грудную полость вскрывают, удаляя грудную кость и перерезая хрящи между грудной костью и ребрами. Можно также удалить грудную стенку с од­ной или с двух сторон, перерезав ребра реберными ножницами вблизи позво­ночника и грудной кости. Во вскрытой полости определяют положение орга­нов, постороннее содержимое и состояние реберной плевры.

4. После этого извлекают органы ротовой полости, шеи, грудной, брюшной и тазовой полостей единым органокомплексом. Вначале разрезают мышцы нижней челюсти и извлекают язык, перерезают сочленение между ветвями подъя­зычной кости, затем левой рукой подтягивают язык, а правой перерезают ткани вокруг глотки, гортани, трахеи, пищевода с внутренней поверхности первой пары ребер и извлекают вместе комплекс органов головы, шеи, легкие и сердце. Затем подрезают диафрагму и извлекают из трупа все органы брюшной полости.

5. Осматривают органы, не отделяя их друг от друга. При необходимости можно разъединить и обследовать каждый орган в отдельности.[7]

2.3 Цитология. Техника цитологии

В настоящее время метод цитологической диагностики в ветеринарии, имеет такое же важное значение, как и в медицине, применяемый для постановки диагноза при различных образованиях.[9]

Цитологическое исследование – это анализ отдельных клеток или небольших групп клеток, взятых с поверхности поражения, из выпотов или путем пункции образований. В ходе клинического обследования забор образцов клеток из пораженных участков позволяет получить важную информацию и диагностировать заболевание. Цитологическое исследование является сравнительно недорогим, легкодоступным, в большинстве случаев позволяющим быстро получить диагноз и начать лечение. Однако для получения качественного материала необходимы определенный навык и понимание, в каких случаях нужно применить тот или иной метод забора.[8]

Основное значение цитологического метода — получить ответ на вопрос о наличии или отсутствии злокачественного новообразования. В процессе дифференциальной диагностики определяется характер патологического процесса и устанавливаются воспалительные, реактивные, пролиферативные или предраковые поражения, а также доброкачественные опухоли.[9]

Один из наиболее часто используемых методов забора материала, является биопсия. Биопсия – метод исследования, при котором проводится прижизненный забор клеток или тканей (биоптата) из организма с диагностической или исследовательской целью. Биопсия является обязательным методом подтверждения диагноза при подозрении на наличие онкологических заболеваний.

Виды биопсий:

Эксцизионная биопсия – забор для исследования всего пораженного участка (органа). Выполняется, как правило, для гистологического исследования.

Инцизионная биопсия – забор для исследования части патологического образования. Осуществляется для цитологического и гистологического исследований.

Тонкоигольная биопсия – забор для исследования материала (клеток) путем пункции иглой. Выполняется для цитологического исследования. Существуют аспирационная и неаспирационная методики.

Виды материалов, используемых для цитологического исследования:

Отпечатки нужны для получения образцов клеток с поверхностных экссудативных поражений, а также клеток с поверхности среза удаленного органа/образования. Требуется просто приложить сухое предметное стекло к поражению, чтобы клетки прилипли к поверхности стекла.

В случае сухих десквамативных поражений либо в случае, когда поражения недоступны для предметного стекла (межпальцевое пространство), используют скотч-тест (прижимание липкой стороны скотча к поражению).

В случае удаленных образований нужно промакнуть бумажной салфеткой место среза и аккуратно (без давления) приложить его к предметному стеклу.

Соскобы – материал для получения образцов клеток с поверхностных поражений и при эндоскопических исследованиях (соскобы с кожи, из прямой кишки, трахеи и т. п.). Используют тупую сторону скальпеля или край предметного стекла, цитощетки. Собирают материал соскабливающими движениями, а затем размазывают по предметному стеклу без лишнего давления.[8]

В моей работе материал набран методом мазок – отпечаток и методом соскоба, окрашен по Романовскому – Гимзе. Окрашивание по Романовскому — Гимзе — цитологический метод окрашивания микроорганизмов, клеточных структур и тканей различных видов (в том числе крови) для изучения методом световой микроскопии. Предложена в 1904году Густавом Гимзой. В авторской версии название красителя — «Giemsasche Lösung für die Romanowsky Färbung» (Раствор Гимзы для окраски по Романовскому). Окрашивает ацидофильные образования в различные оттенки красного цвета, базофильные — в цвета от пурпурного до синего.[10]

Метод окраски. Мазки, фиксированные в метиловом спирте, окрашивают раствором (1 мл готовой жидкой краски + 2 мл основного буферного раствора + 47 мл дистиллированной воды) в течение 40—120 мин (продолжительность окрашивания подбирают эмпирически). Пользуются фосфатным буфером, но рН буфера зависит от вида мазка. Ополаскивают в дистиллированной воде, высушивают и исследуют при иммерсии.

III. Результаты исследования

3.1 Патоморфологические изменения в органах и тканях при меланом

При патоморфологическом исследовании трупа, во внутренних органах и тканях были обнаружены следующие изменения:

Кожа и подкожная клетчатка – узловатые образования, размером 0,2 см-1,0 см, гладкие, блестящие, темно-фиолетового цвета.

Лимфоузлы – множественные точечные образования черного цвета.

Легкие - множественные точечные и петехиальные (пятнистые) образования черного цвета.

Печень – дольчатое строение сохранено, края острые, капсула незначительно напряжена, под капсулой обнаружены множественные точечные и петехиальные (пятнистые) образования черного цвета.

Трахея – единичные точечные пятна темно-фиолетового цвета.

Почки - плотной консистенции, гладкие однососочковые, бобовидной формы, желтовато-красного цвета, паранефральный жир хорошо развит, фиброзная капсула почек плотная напряжена, под капсулой множественные точечные образования черного цвета.

Селезенка – лентовидной формы, увеличена в размере, черно-красного цвета, капсула напряжена, соскоб обильный, под капсулой наблюдаются множественные образования в виде гладких блестящих узлов черного цвета.

Головной мозг – мозговые оболочки бледно-розовые, сосуды кровенаполнены, пятнистые округлые образования черного цвета, извилины сформированы, сосуды головного мозга кровенаполнены, отмечаются точечные округлые образования.

В нозологическом заключении можно сказать следующее, что смерть животного наступила в результате остановки сердца и дыхательной деятельности, которая возникла на фоне чрезмерной активации иммунной системы, так называемого чрезмерного иммунного ответа организма. Развивающийся на этом фоне, системный воспалительный синдром, в первую очередь пагубно влияет на сердечно-сосудистую и дыхательную системы, повышает проницаемость сосудистой стенки, и негативно воздействует на другие органы и ткани.

3.2 Результаты цитологического исследования мазка - отпечатка и соскоба при меланоме

Визуализируется клетки округлой и полигональной формы. Цитоплазма клеток от бледного розового до лавандового цвета. В цитоплазме визуализируется зерна и глыбки черного, темно-синего цвета. Ядро овальной формы, азурофильно окрашен. В ядре просматривается от одного до трех ядрышек, интенсивно базофильно окрашенных. Соотношение ядро – цитоплазма сдвинуто в сторону ядра, визуализируются макрофаги с пенистой цитоплазмой, с зернами и глыбками черного, темного-синего цвета. Фон препарата так же содержит темные гранулы.

В связи с невозможностью оценки митотического индекса, в цитологическом материале заключение- «пигментная опухоль».

IV. Выводы

По результатам исследования можно сделать следующие выводы:

1) При изучении литературы по данному вопросу, мы выяснили, что данная тема очень актуальна среди онкологических заболеваний у мелких животных.

2) Изучив и проанализировав особенности патоморфологических изменений в органах и тканях при меланоме, мы выяснили, что они соответствуют типичным изменениям, которые могут наблюдаться при данной опухали.

Рекомендации по результатам исследования:

1. Описанные патоморфологические изменения, наблюдаемые при заболевании собак и кошек спонтанными опухолями, можно применять для ранней и дифференциальной диагностики онкологических заболеваний, что позволит выбрать правильный метод лечения, в том числе и у человека.

2. Материалы могут быть использованы при написании учебников и практических пособий по различным направлениям ветеринарной медицины.

V.Список источников информации

1. Сравнительный обзор меланоцитарных новообразований С.Х. Смит, М. Х. Гольдшмидт, Премьер-министр Макманус.

2. Спонтанно возникающая меланома у животных и их значение для меланомы человека. Луиза ван дер Вейден, Томас Бренн, Элизабет Паттон, Джеффри Вуд, и Дэвид Дж. Адамс

3. https://www.biocontrol.ru/uslugi-i-ceny/melanoma.html

4. Заболевания кожи II часть. Летуновская А. В., ветеринарный врач-онколог, член Европейского общества ветеринарных онкологов (ESVONC). Ветеринарная клиника неврологии, травматологии и интенсивной терапии, г. Санкт-Петербург.

5. Меланоцитома и меланома кожи собак и кошек. Текст статьи из руководства SMALL ANIMAL DERMATOLOGY A COLOR ATLAS AND THERAPEUTIC GUIDE 2017г. Перевод с англ.: ветеринар Васильев АВ

6. Патологическая анатомия, секционный курс, судебно-ветеринарная экспертиза. Электронный учебно-методический комплекс, автор Смердова М.Д

7. Техника вскрытия трупов мелких животных. https://studopedia.ru/5_134237_tehnika-vskritiya-trupov-melkih-zhivotnih.html

8. Как правильно отобрать материал на цитологическое исследования автор Полина Лозовская, ветеринарный врач-лаборант, цитолог независимой ветеринарной лаборатории "Поиск", г.Санкт-Петербург.

9. Цитологическая диагностика в ветеринарии. https://maxivet.su/tsitologicheskaya-diagnostika-v-veterinarii/

10. Окрашивание по Романовскому – Гимзе. https://ru.wikipedia.org/wiki/%D0%9E%D0%BA%D1%80%D0%B0%D1%88%D0%B8%D0%B2%D0%B0%D0%BD%D0%B8%D0%B5_%D0%BF%D0%BE_%D0%A0%D0%BE%D0%BC%D0%B0%D0%BD%D0%BE%D0%B2%D1%81%D0%BA%D0%BE%D0%BC%D1%83_%E2%80%94_%D0%93%D0%B8%D0%BC%D0%B7%D0%B5

11. Трапезников Н.Н., Шайн А.А. Онкология. М., 1992, с. 5-18

Приложение 1

Меланома

Рис. 1 Меланома кожи у кошки

Приложение 2

Патоморфологическое исследование трупа

Рис.2 Рис.3

Изменения в лёгких Изменения в печени

Рис. 4 Рис. 5

Изменения в трахее Изменения в почках

Рис. 6 Изменения в селезёнке

Рисунки 7-8

Изменения в головном мозге

Приложение 3

Цитологическая картина пигментной опухоли

Рисунки 9-10