Проведение микробиологической диагностики диагностики дифтерии

Государственное автономное образовательное учреждение среднего профессионального образования Республики Крым «Евпаторийский медицинский колледж»

План занятия (практическое) № 38

Тема занятия: Проведение микробиологической диагностики дифтерии

МДК.04.01. Теория и практика лабораторных микробиологических и иммунологических исследований

Специальность: 31.02.03. Лабораторная диагностика

Курс: 2-ой

Цели занятия:

Образовательные: Рассмотреть морфологические, культуральные, биохимические и серологические свойства коринебактерий; Изучить микробиологическую диагностику дифтерии; Рассмотреть определение токсигенности культуры коринебактерий

Развивающие: активизировать познавательную активность студентов, обобщать и систематизировать знания в области микробиологии, подвести студентов к пониманию сущности изучаемого материала.

Воспитательные: приобщить студентов к профессиональной деятельности и к связанным с ней социальным функциям в соответствии с направлением подготовки и будущим уровнем квалификации, воспитать нравственно-деонтологические качества, чувство долга и ответственности.

Междисциплинарные связи:

Физико-химические методы исследования и техника лабораторных работ

Теория и практика лабораторных общеклинических исследований

Анатомия и физиология человека

Основы латинского языка с медицинской терминологией

Внутридисциплинарные связи:

Проведение микробиологического исследования воздушно-капельных инфекций. Контрольный срез

Место проведения: лаборатория 407

Тип занятия: практическое

Количество часов: 4 академических

Обеспечение занятия: методическая разработка

Обеспечение занятия: методическая разработка, инструкция, раздаточный материал

Литература: Ф.К.Черкес, Л.Б.Богоявленская, Бельская Н.А. «Микробиология» М: Альянс 2019г.

Интернет- ресурсы: http://rospotrebnadzor.ru

Студент должен уметь:

- готовить исследуемый материал, питательные среды, реактивы и оборудование для проведения микроскопических, микробиологических и серологических исследований;

- проводить утилизацию отработанного материала, дезинфекцию и стерилизацию, используемой в лаборатории посуды, инструментария, средств защиты рабочего места и аппаратуры;

Студент должен знать:

- задачи, структуру, оборудование, правила работы и техники безопасности в микробиологической лаборатории.

- общие характеристики микроорганизмов, имеющие значение для лабораторной диагностики

- требования к организации работы с микроорганизмами III–IV групп патогенности

Студент должен обладать:

Общие компетенции

ОК 2. Организовывать собственную деятельность, выбирать типовые методы и способы выполнения профессиональных задач, оценивать их эффективность и качество.

ОК 3. Принимать решения в стандартных и нестандартных ситуациях и нести за них ответственность.

ОК 4. Осуществлять поиск и использование информации, необходимой для эффективного выполнения возложенных на него профессиональных задач, а также для своего профессионального и личностного развития.

ОК 5. Использовать информационно-коммуникационные технологии в профессиональной деятельности.

ОК 6. Работать в коллективе и команде, эф­фективно общаться с коллегами, руководством, пациентами.

ОК 8. Самостоятельно определять задачи профессионального и личностного развития, заниматься самообразованием, осознанно планировать и осуществлять повышение своей квалификации.

ОК 9. Ориентироваться в условиях смены технологий в профессиональной деятельности.

Профессиональные компетенции

ПК 4.1. Готовить рабочее место и аппаратуру для проведения ­ лабораторных микробиологических исследований.

ПК 4.2. Проводить лабораторные микробиологические и иммунологические исследования биологических материалов, проб объектов внешней среды и пищевых продуктов; участвовать в контроле качества.

ПК 4.3. Регистрировать результаты проведенных исследований

ПК 4.4. Проводить утилизацию отработанного материала, дезинфекцию и стерилизацию использованной лабораторной посуды, инструментария, средств защиты.

Структура занятия:

Организационный момент 10 мин.

Мотивация (цели) занятия 3 мин.

Оценка знаний студентов (проверка исходного уровня знаний) 27 мин.

Практическая часть 120 мин.

Итоговый контроль 10 мин.

Задание на дом 2 мин.

Подведение итогов занятия, оценка работы студентов 8 мин.

Ход занятия

Организационный момент: Приветствие, вступительное слово преподавателя. Проверка присутствующих, внешнего вида, готовности студентов к практическому занятию. Инструктаж по охране труда

2. Мотивация (цели) занятия: Изучение микробиологической диагностики дифтерии является обязательным разделом профессионального модуля в связи с распространенностью данной инфекции.

3.Оценка знаний студентов (проверка исходного уровня знаний):

а) проверка знаний: Тестовый контроль (приложение №1)

б) проверка внеаудиторной самостоятельной работы: не предусмотрена

в) подведение итогов контроля – индивидуальный контроль.

4. Практическая часть:

а) подготовка студентов к самостоятельной работе: объяснение преподавателем материала занятия для выполнения заданий;

б) самостоятельная работа студентов: Взять мазок со слизистой оболочки носа и смыв с кожи; Приготовить среду для коринебактерий, провести посев; Приготовить мазки, окрасить по Граму и Нейсеру

в) подведение итогов самостоятельной работы: проверка качества выполненного задания и оформления рабочей тетради.

5. Итоговый контроль – тестирование; Решение ситуационных задач

6.Задание на дом: Подготовка по теме «Возбудители коклюша, паракоклюша», учебник стр.357-365

7.Подведение итогов занятия, оценка работы студентов - выставление оценок.

Преподаватель ______________________ А.И. Гончарова

Приложение№1

Морфологическими признаками дифтерийной бактерии являются:

Факторами патогенности дифтерийной бактерии являются:

Источниками возбудителя дифтерии являются:

Основным механизмом передачи возбудителя дифтерии является:

После вакцинации дифтерийным анатоксином развивается иммунитет:

Для определения наличия иммунитета у человека после вакцинации дифтерийным анатоксином используют:

Возбудитель дифтерии относится к роду:

Возбудитель дифтерии окрашивают по методу:

На селективной среде R-формы колоний образуют дифтерийные бактерии типа:

Местом локализации дифтерийной бактерии в организме человека является:

Исследуемый материал от больных дифтерией высевают на:

Проба Пизу при исследовании дифтерийных бактерий определяет:

Для лечения дифтерии применяют:

Синтез экзотоксина у дифтерийной бактерии кодирует:

Исследования возбудителя дифтерии на токсигенность проводят методом:

Иммунитет после перенесенной дифтерии:

Для профилактики дифтерии применяют:

Ответы:

1.Морфологическими признаками дифтерийной бактерии являются:
-полиморфные прямые или слегка изогнутые палочки, иногда с булавовидными концами(располагаются в виде буквы V )
-Гр+
-по полюсам располагаются зёрна волютина, обладающие метахромазией( по Нейссеру)
-имеют микрокапсул
-неподвижны

2.Факторами патогенности дифтерийной бактерии являются:
-факторы адгезии и колонизации(элементы клет.стенки)
-гиалуронидаза, нейраминидаза(факторы инвазии)
-токсический гликолипид(6-6-диэфир трегалозы)
-белковый экзотоксин(гистотоксин)

З.Источниками возбудителя дифтерии являются:
-больные
-бактерионосители токсигенных штаммов 

4.Основным механизмом передачи возбудителя дифтерии является: аэрогенный

5.После вакцинации дифтерийным анатоксином развивается иммунитет: приобретённый активный поствакцинальный антитоксический

6.Для определения наличия иммунитета у человека после вакцинации дифтерийным анатоксином используют:
-пробу Шика (подкожная проба)
-РПГА с эритроцитарным дигностикумом, сенсибилизированным дифтерийным анатоксином

7.Возбудитель дифтерии относится к роду: Corynebacterium

8.Возбудитель дифтерии окрашивают по методу:
- Нейссера
-Грама
-Леффлеру(метиленовым синим)

9.На селективной среде R-формы колоний образуют дифтерийные бактерии типа: С.gravis

10.Местом локализации дифтерийной бактерии в организме человека является:
-зев
-нос
-гортань
-ухо
-глаза
-половые органы
-кожа

11.Исследуемый материал от больных дифтерией высеивают на:
-кровяной агар
-среда Клауберга (питат.агар с теллуритом натрия)
-хинозольная среда Бучина
-модифиц. Среда Тинсдаля
-свёрнутая сывороточная среда Ру(лошад.сыворотка)
-свёрнутая сывороточная среда Леффлера

12.Проба Пизу при исследовании дифтерийных бактерий определяет: цистиназу

13.Для лечения дифтерии применяют:
-иммуноглобулин нормальный человеческий
-противодифтерийная антитоксическая сыворотка
-антимикробные препараты(пенициллин,другие бета-лактамы.хлорамфеникол,рифампицин,сульфаниламиды)
-можно анатоксин (стимуляция иммунитета)

14.Синтез экзотоксина у дифтерийной бактерии кодирует:
tox-ген профага

15.Исследования возбудителя дифтерии на токсигенность проводят методам:
-биологические пробы на животных
-заражение куриных эмбрионов
-заражение культур клеток
-метод твёрдофазного иммуноферментного анализа с использованием меченых пероксидазой антитоксинов(ИФА)
-использование ДНК-зонда(на токс-ген)(ПЦР)
-метод преципитации в геле

16.Иммунитет после перенесённой дифтерии: прочный стойкий пожизненный антитоксический
17.Для профилактики дифтерии применяют:
-АКДС(адсорбированная коклюшно-дифтерийно-столбнячная вакцина)
-АДС(адсорбированный дифтерийно-столбнячный анатоксин)
-АД(дифтерийный адсорбированный очищенный анатоксин)
-иммуноглобулин нормальный человеческий

Алгоритм

«Окраска препарата методом Грама»

Цель: Выявление грам-положительных и грам-отрицательных микроорганизмов

Оснащение: Набор красителей для окраски, подговленные препараты

Алгоритм

Реакция двойной встречной иммунодиффузии по Оухтерлони (реакция преципитации в геле)

Принцип метода: В агаровом геле формируют лунки, в которые вносят антигены А и Б и сыворотку, содержащую соответствующие антитела (Ат).

Антитела и антигены диффундируют в агар и образуют линии преципитации.

Учет результатов:

Возможны три варианта реакции:

а – если антигены идентичны, образуются идентичные линии преципитации;

б – если антигены частично идентичны, образуется одна оторванная от общей линия преципитации (это связано с тем, что одно антитело не реагирует с антигеном и продвигается дальше);

в – если антигены не идентичны, линии преципитации перекрещиваются.

Препараты для специфической профилактики и

терапии дифтерии, коклюша

Приложение №2

Задача №52. В одном из классов средней школы зарегистрированы заболевания дифтерией.

1) Как проверить наличие иммунитета к дифтерии у контактных школьников?

2) Как установить источник инфекции?

3) Какие препараты применяют для специфической профилактики дифтерии?

Ответ к задаче №52:

1) Поставить РПГА с эритроцитарным диагностикумом. Титр антител при наличии иммунитета должен быть не менее 1:20.

2) Выявить бактерионосителей токсигенных штаммов бактериологическим методом с последующим определением эпидмаркеров (серовары, биовары, фаговары, корициновары).

3) Для специфической профилактики применить вакцины АКДС, АДС-М, АД.

 

Задача №53. Больной поступил в стационар с предположительным диагнозом дифтерии зева.

1) Какой материал подлежит исследованию?

2) Какие экспресс-методы диагностики необходимо применить для решения вопроса о диагнозе?

3) Какой метод специфической терапии применить при подтверждении диагноза?

Ответ к задаче №53:

1) Слизь из зева, пленки фибрина.

2) Провести РПГА с антительным эритроцитарным антитоксическим диагностикумом или ИФА для обнаружения в фильтрате материала дифтерийного экзотоксина.

3) Для нейтрализации токсина немедленно назначить противодифтерийную антитоксическую сыворотку.

Задача №55.У больного ребенка в мазке из зева были обнаружены бактерии, напоминающие дифтерийные палочки.

1) Можно ли на основании этих данных поставить диагноз «дифтерия»?

2) Какие необходимо провести дополнительные исследования для проверки диагноза?

3) Какие препараты следует назначить для лечения больного?

Ответ к задаче №55:

1) Нельзя, т.к. микроскопический метод является ориентировочным. Ребенок мог быть носителем нетоксигенного штамма дифтерийной палочки.

2) Необходимо провести бактериологическое исследование. У выделенной чистой культуры обязательно определить наличие токсина. Для этого можно использовать реакцию преципитации в агаре.

3) Для лечения необходимо экстренно назначить антитоксическую противодифтерийную сыворотку с целью нейтрализации токсина.

1. В клинику доставлен больной с тяжёлым общим состоянием, с высокой температурой, затруднённым дыханием. Бактериоскоп. иссл-ие материала из зева и дых. путей позволило предварительно диагностировать дифтерийный круп. Какой метод окраски при этом был применен?

А. Циля-Нильсена

В. Нейссера

С. Бурри-Гинса

D. Пешкова

Е. Ожешки

2. В связи со случаем дифтерии возникла необходимость провести предупредительную вакцинацию в студенческой группе. Какой препарат следует использовать для создания искусственного активного иммунитета?

А. Дифтерийный анатоксин

В. Антидифтерийную сыворотку

С. Специфический иммуноглобулин

D. Вакцину АКДС

Е. Вакцину из убитых бактерий

3. В закрытом коллективе возникла необходимость проверить состояние иммунитета к дифтерии, чтобы обосновать необходимость вакцинации. Какие иссл-ия следует провести с такой целью?

А. Проверить медицинскую документацию относительно вакцинации

В. Проверить членов коллектива на носительство палочки дифтерии

C. Установить уровень антител против дифтерийной палочки

D. Установить титр-антитоксинов в РНГА

Е. Проверить состояние иммунитета на носительство дифтерийной палочки

4. В мазке из материала, взятого от больного с подозрением на дифтерию, обнаружены желтые палочки с синими включениями на концах. Какой способ окраски использован в данном случае?

А. Нейссера

В. Леффлера

С. Циля- Нильсена

D. Козловского

Е. Романовского

5.У больного ребенка с подозрением на дифтерию было взято на исследование отделяемое пораженной слизистой оболочки зева. Приготовлен и окрашен мазок. При микроскопии обнаружены желтые палочки с темно-синими утолщениями на концах. Какой структурный элемент микробной клетки определяется в выявленных микроорганизмах?

А. Споры

В. Плазмиды

С. Капсула

D. Зерна волютина

Е. Жгутики

6. От больного ребенка с подозрением на дифтерию выделены коринебактерии дифтерии. Какое исследование необходимо провести, чтобы убедиться, что данный микроорганизм является возбудителем дифтерии у этого ребенка?

A. Проверить токсигенность микроорганизма

В. Провести окраску но методу Бурри -Гинса

С. Сделать посев на кровяной агар

D. Заразить кролика

Е. Провести реакцию агглютинации

7. Среди детей школы имеют место случаи заболевания ангиной. При микроскопии мазков с миндалин, окрашенных по методу Нейссера, найдены тонкие палочки желтого цвета с темно-коричневыми зернами на концах, которые размещаются в виде римской цифры пять. Какую инфекцию можно подозревать в этом случае?

A. Дифтерию

В. Инфекционный мононуклеоз

С. Листериоз

D. Тонзиллит

E. Пневмонию

8. В больницу поступил ребенок с диагнозом дифтерия. Какими препаратами для специфической терапии Вы воспользуетесь?

А. Противодифтерийной антитоксической сывороткой, антибиотиками

В. Дифтерийным анатоксином антибиотиками

С. Вакциной «Кодивак», сульфаниламидами

D. Дифтер. вакцинами: АКДС, АДС, АД

Е. Дифтерийным бактериофагом

9. Обследуя ребенка 6 лет - врач заметил на глоточных миндалинах сероватую пленку, при попытке удаления которой возникло слабое кровотечение. Бактериоскопия мазков из миндалин показала наличие грам+ бактерий булавоподобной формы. Какие симптомы могут проявиться у ребенка в самые ближайшие дни, если не будет проведено специфическое лечение?

A. Волнообразная лихорадка

В. Отек легких

С. Очень сильный приступообразный кашель

D. Папулёзные высыпания на коже

Е. Токсич. поражения сердца, печени, почек

10. На глоточных миндалинах двухлетнего мальчика, который не получая плановые прививки АКДС, выявлены микроорганизмы, которые по морфологическим и биохимическим признакам идентичны Corynebacterium diphtheria. Но реакция преципитации в геле с антитоксической сывороткой дала отрицательный результат. Какую форму инфекционного процесса может вызывать этот возбудитель у ребенка, если срочно не начать лечение?

А. Бессимптомное бактерионосительство

В. Легкая нетоксическая форма заболевания

С. Токсическая осложненная форма заболевания

D. Хроническое заболевание с поражением внутренних органов

Е. Персистирующая инфекция

11. В детском саду нужно провести специфическую профилактику дифтерии. Какой препарат следует для этого использовать?

А. Анатоксин

В. Антибиотики

С. Иммуномодуляторы

D. Корпускулярную вакцину

Е. Сыворотку

12. У больного с подозрением на дифтерию, во время бактериоскопического исследования мазка из зева выявлены палочкоподобные бактерии с зернами волютина. Какой этиотропный препарат следует выбрать в данном случае?

А. Эубиотик.

В. Бактериофаг.

С. Дифтерийный анатоксин

D. Противодифтерийную антитоксическую сыворотку.

Е. Интерферон.

13. Обследуя больного ребенка, у которого отмечалось повышение температуры до 38Сº, боли в горле при глотании, одутловатость лица, адинамия, грязно-белые пленки на миндалинах, врач заподозрил дифтерию. Какими микробиологическими методами можно подтвердить предполагаемый диагноз?

А. Аллергологическим + серологическим.

В. Микроскопическим + аллергологическим

С. Микроскопическим + серологическим.

D. Микроскопическим + бактериологическим.

Е. Биологическим + серологическим

14. У ребенка с подозрением на дифтерию из зева выделена чистая культуру микроорганизмов и изучены ее морфологические, тиикториальные, культуральные и биохимические свойства, оказавшиеся типичными для возбудителя дифтерии. Какое исследование необходимо еще провести для окончательного заключения о том, что выделена патогенная дифтерийная палочка?

А. Определение токсигенных свойств.

В. Определение протеолитических свойств.

С. Определение уреазной активности.

D. Определение цистиназной активности.

Е. Определение способности расщеплять крахмал

15. От больного выделили чистую культуру коринобактерий дифтерии. Какую иммунологическую реакцию следует использовать для определения токсигенности бактерий?

А. Реакцию агглютинации

В. Реакцию преципитации в агаре

С. Реакцию связывания комплемента

D. Реакцию торможения гемагглютинации

Е. Реакцию косвенной гемагглютинации

16. Токсигенность возбудителя дифтерии определяют на плотной питательной среде, на которую наносят полоску фильтровальной бумаги, смоченную антитоксической противодифтерийной сывороткой, рядом с которой делают посевы исследуемых культур в виде бляшек и заведомо токсигенный штамм. По каким признакам устанавливают токсигенность культуры?

А. По образованию линий преципитации

В. По образованию диффузных зон помутнения

С. По слиянию линий преципитации

D. По отсутствию линий преципитации

Е. По образованию кольца преципитации