Проведение микробиологического исследования крови

Государственное автономное образовательное учреждение

среднего профессионального образования Республики Крым

«Евпаторийский медицинский колледж»

Цикловая методическая комиссия лабораторных дисциплин

МЕТОДИЧЕСКАЯ РАЗРАБОТКА

открытого практического занятия № 63

по теме: Проведение микробиологического исследования крови

МДК.04.01Теория и практика лабораторных микробиологических и иммунологических исследований

Специальность: 31.02.03 Лабораторная диагностика

Вид занятия: практическое

Количество часов: 4

г. Евпатория, 2023г.

Автор: Гончарова А.И. – преподаватель колледжа, высшая квалификационная категория

Рассмотрено и одобрено

на заседании ЦМК

лабораторных дисциплин

Протокол №____________

От «_____» ______________2023 г.

председатель ЦМК

______________Э.Н. Зейналиева

Методическая цель занятия:

Демонстрация инновационных педагогических технологий в ходе проведения практического занятия с моделированием производственной ситуации

Образовательные:

Раскрыть значение и роль бактериологических методов исследования крови в диагностике сепсиса и бактериемии

Рассмотреть эпидемиологию сепсиса

Провести идентификацию микроорганизмов на разных этапах исследования гемокультуры

Развивающие:

Развивать навыки самообразования, творческие способности студентов

Продолжить развитие учебно-интеллектуальных уменийвыделять главное и существенное

устанавливать причинно-следственные связи

Воспитательные:

воспитывать уважение к людям, науки, их достижениям

продолжить формирования умения работать в коллективе, принимать совместные решения

продолжить формирования здорового образа жизни

Междисциплинарные связи:

Теория и практика сестринского дела

Анатомия и физиология человека

Безопасная среда для пациента и персонала

Внутридисциплинарные связи:

Общая микробиология

Частная микробиология

Основы иммунологии

Санитарная микробиология

Место проведения: лаборатория 407

Количество часов: 4 академических

Обеспечение занятия: методическая разработка

Литература:

1. Ф.К.Черкес, Л.Б.Богоявленская, Бельская Н.А. «Микробиология»

М: Альянс 2014г.

2.Камышева К.С. Основы микробиологии, вирусологии и иммунологии / Камышева К.С. – Ростов н/Д: Феникс, 2015. – 281 с.

Дополнительные источники:

Медицинская микробиология, вирусология и иммунология: в 2 т. / под ред. В. В. Зверева, М. Н. Бойченко. - Том 1. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2010.- 448 с.

Микробиология с основами эпидемиологии и методами микробиологических исследований: учебник. Сбойчаков В.Б. 2011. - 608 с

Интернет- ресурсы:

1. МедУнивер - медицинский информационный портал для интересующихся...Общая микробиология. meduniver.com

2. Сайт http://rospotrebnadzor.ru/

Студент должен уметь:

- принимать, регистрировать, отбирать клинический материал, пробы объектов внешней среды и пищевых продуктов;

- готовить исследуемый материал, питательные среды, реактивы и оборудование для проведения микроскопических, микробиологических и серологических исследований;

- проводить микробиологические исследования клинического материала, проб объектов внешней среды и пищевых продуктов;

- оценивать результат проведенных исследований;

- вести учетно-отчетную документацию;

- проводить утилизацию отработанного материала, дезинфекцию и стерилизацию, используемой в лаборатории посуды, инструментария, средств защиты рабочего места и аппаратуры;

Студент должен знать:

- задачи, структуру, оборудование, правила работы и техники безопасности в микробиологической лаборатории.

– общие характеристики микроорганизмов, имеющие значение для лабораторной диагностики

- требования к организации работы с микроорганизмами III–IV групп патогенности

- механизм иммунологических реакций

Общие компетенции:

ОК 2. Организовывать собственную деятельность, выбирать типовые методы и способы выполнения профессиональных задач, оценивать их эффективность и качество.

ОК 3. Принимать решения в стандартных и нестандартных ситуациях и нести за них ответственность.

ОК 4. Осуществлять поиск и использование информации, необходимой для эффективного выполнения возложенных на него профессиональных задач, а также для своего профессионального и личностного развития.

ОК 5. Использовать информационно-коммуникационные технологии в профессиональной деятельности.

ОК 6. Работать в коллективе и команде, эф­фективно общаться с коллегами, руководством, пациентами.

ОК 7. Брать ответственность за работу членов команды (подчиненных), за результат выполнения заданий.

ОК 8. Самостоятельно определять задачи профессионального и личностного развития, заниматься самообразованием, осознанно планировать и осуществлять повышение своей квалификации.

Профессиональные компетенции

ПК 4.1. Готовить рабочее место и аппаратуру для проведения ­ лабораторных микробиологических исследований.

ПК 4.2. Проводить лабораторные микробиологические и иммунологические исследования биологических материалов, проб объектов внешней среды и пищевых продуктов; участвовать в контроле качества.

ПК 4.3. Регистрировать результаты проведенных исследований

ПК 4.4. Проводить утилизацию отработанного материала, дезинфекцию и стерилизацию использованной лабораторной посуды, инструментария, средств защиты.

Структура занятия:

Организационный момент 10 мин.

Мотивация (цели) занятия 3 мин.

Оценка знаний студентов (проверка исходного уровня знаний) 37 мин.

Практическая часть 120 мин.

Подведение итогов занятия, оценка работы студентов 8 мин.

Задание на дом 2 мин.

Ход занятия

Организационный момент

(Взаимоприветствие, отметка отсутствующих, внешний вид, готовность к практическим занятиям;Инструктаж по охране труда)

Мотивация (цели) занятия:

Проведениемикробиологического исследования крови является необходимым элементом в процессе освоения программы профессионального модуля и является составляющей частью подготовки медицинских лабораторных техников.

2. Оценка знаний студентов (проверка исходного уровня знаний):

а) проверка знаний (Тестирование проводится с применением сервисов web-2.0 Socrative либо на традиционном бумажном носителе).

б) проверка внеаудиторной самостоятельной работы

(Устное обсуждение проблемы)

Оценивание, замечания по работе.

Практическая часть:

а) подготовка студентов к самостоятельной работе (проведение инструктажа по выполнению заданий):

б) самостоятельная работа студентов:

Демонстрация взятия крови на стерильность (гемокультуру) – проводят студенты отделения Сестринское дело;

Приготовление питательные среды КА (для выделения стрептококков), МСА (для выделения стафилококков);

Приготовление мазка из гемокультуры, окрашивание по Граму, микроскопия;

Проведение посева гемокультуры на среды;

Проведение постановки реакции плазмокоагуляции;

Зарисовка схемы исследования.

в) подведение итогов самостоятельной работы

Оформление в рабочей тетради выводов о проделанной работе

Итоговый контроль

Решение ситуационных задач

Проверка преподавателем работ студентов

Задание на дом

Повторение темы «Методы микробиологического исследования дыхательной системы»

Подведение итогов занятия, оценка работы студентов

Преподаватель оценивает работу студентов, корректирует ошибки, отвечает на вопросы студентов

Преподаватель Гончарова А.И.

(I квалификационная категория)

Приложение 1

Основные положения изучаемой темы

Кровь - один из наиболее распространенных образцов биоматериала, исследуемых в бактериологической лаборатории.

Исследование крови на стерильность является важнейшим методом лабораторного исследования у пациентов с определенными показаниями.

Сепсис – тяжелое инфекционно-аллергическое заболевание, обусловленное генерализацией инфекции.

Сепсис – это не только хирургическая, но и общемедицинская проблема. Лежащие в его основе процессы, имеют важное значение для понимания общих механизмов гомеостаза и воспаления.

Частота случаев сепсиса не снижается, несмотря на применение новейших антибиотиков, внедрение современных методик медикаментозного и хирургического лечения. В целом в Европе ежегодно регистрируется до 500000 случаев сепсиса. Число летальных исходов при сепсисе, по данным разных авторов, колеблется от 30 до 90%.

Этиология

За последнее время характер микрофлоры при сепсисе существенно изменился. Сепсис вызывается в основном гноеродными микроорганизмами и их токсинами. Анаэробный сепсис встречается крайне редко. Если раньше наиболее частой причиной сепсиса был стафилококк, то теперь ведущую роль играет грам-отрицательная флора (кишечная палочка, синегнойная палочка, клебсиела, протей, энтеробактерии, псевдомоны), хотя стафилококки и стрептококки не потеряли своего значения в этиологии этого заболевания.

Повторные бактериологические посевы крови при сепсисе свидетельствуют о том, что причиной данного заболевания является стафилококк в 50-60% случаев, грам-отрицательная флора – в 15-20%, стрептококк – в 5-6%, у 25-30% больных высеять микрофлору из крови не удается.

Очаги внедрения инфекции:

1). Травмы: открытые повреждения костей, суставов, органов брюшной и грудной полостей, мочеполовой системы; раны, особенно с большой зоной повреждения, огнестрельные ранения; глубокие ожоги.

2). Местные гнойные процессы: тромбофлебит, остеомиелит, артрит, лимфаденит, перитонит, плеврит, карбункул, абсцесс, флегмона, мастит, послеродовый эндометрит и др.

3). Гангрены различного происхождения.

4). Послеоперационные инфекционные осложнения.

5). Рана пупочного канатика (у новорожденных).

6). Венозные катетеры, сосудистые протезы и др. («катетерный сепсис»).

7). Очаг может быть не установлен (источником в этих условиях могут быть кариозные зубы, тонзиллит и др).

Микробиологическое исследование крови.

«Золотым стандартом» в диагностике сепсиса является бактериологическое исследование периферической крови (гемокультура).

Клиническая значимость регистрации бактериемии:

− подтверждение диагноза и определение этиологии инфекционного процесса;

− доказательство механизма развития (например, катетер-ассоциированый сепсис);

− для некоторых ситуаций аргументация тяжести течения патоло-гического процесса (например, инфекционный эндокардит);

− обоснование выбора или смены режима антибиотикотерапии;

− оценка эффективности терапии.

Отсутствие бактериемии не должно исключать возможность диагноза при наличии критериев сепсиса!

Показания к проведению исследования: клиническая картина сепсиса; лихорадочные состояния неустановленной этиологии; подозрение на инфекционные заболевания: брюшной тиф и паратифы, сальмонеллезы, бруцеллез, возвратный тиф, лептоспирозы, малярия, эпидемический менингит, пневмококковые инфекции, пищевые токсикоинфекции (при наличии лихорадки), стафилококковые и стрептококковые инфекции, сибирская язва, туляремия, чума.

Взятие исследуемого материала: 

- взятие крови целесообразно осуществлять во время лихорадочного периода,

- до начала химиотерапии или через 12-24 часа после последнего введения препарата.

Манипуляции проводят с соблюдением правил асептики.

Кровь берут у постели больного или в перевязочной и тут же засевают на питательные среды. Рекомендуется осуществлять эти процедуры вдвоем. Один медицинский работник проводит обработку кожи больного, венопункцию и взятие крови, второй, в это время открывает над пламенем спиртовки пробки флаконов со средами, подставляет их под струю крови из шприца, обжигает горлышки флаконов и закрывает их.

Для бактериологического исследования необходимо 10-20 мл крови, которую тут же засевают на набор питательных сред. Соотношение крови и среды должно быть 1/10-1/60, для устранения бактерицидного действия крови путем ее разведения. 

Однократное исследование крови мало результативно, а в случае обнаружения условно патогенных микроорганизмов, обитающих на коже человека, без результатов повторных исследований трудно отдифференцировать истинную бактериемию от случайной контаминации. Поэтому всегда следует стремиться к проведению серии из 3 и более исследований за определенный промежуток времени.

Методы исследования. 

Минимальный набор питательных сред при исследовании крови согласно  "Методическим указаниям по применению унифицированных микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях включает две среды: “двойную среду “ и “среду для контроля стерильности”.

В дополнение к двум указанным средам можно использовать: "среду со стаканчиком", полужидкую среду Тароцци, жидкую среду Сабуро.

Посевы крови инкубируют при 37 оС  с ежедневным просмотром в течение  первых 8 дней.

При отсутствии видимого роста на 3, 5 и 8 дни со всех сред, кроме “двойной среды” и “среды для контроля стерильности” делают высевы на кровяной агар и мазки по Граму.  

При отсутствии роста в течение 9-10 дней выдают отрицательный ответ, но инкубацию посевов продолжают до 6 недель с просмотром 2-3 раза в неделю, при этом ватно-марлевые пробки парафинируют смесью воск (1/3) - парафин (2/3).

При появлении признаков видимого роста делают мазки, окрашивают их по Граму и в зависимости от результата производят высевы на соответствующие питательные среды. При подозрении на анаэробную флору субкультуры инкубируют параллельно в аэробных и анаэробных условиях.

Оценка диагностической значимости полученных результатов.

Бактериологическая лаборатория при исследовании посевов крови выдает отрицательный ответ в случае, если рост микроорганизмов не обнаружен в течение 10 дней инкубации.

Причиной сепсиса или бактериемии, особенно у ослабленных больных, могут быть любые микроорганизмы, включая условно-патогенные и даже сапрофитические виды. Однако, если обнаружение в крови патогенных микроорганизмов практически всегда свидетельствует об их этиологической значимости, то находки условно-патогенных и сапрофитических видов могут быть следствием контаминации крови в процессе ее взятия или случайного загрязнения посевов при дальнейшей работе с ними.

При дифференциации случайной контаминации от истинных бактериемий или сепсиса необходимо учитывать следующее:

1. При случайной контаминации крови чаще всего выделяются микроорганизмы, входящие в состав нормальной микрофлоры кожи или широко распространенные в окружающей среде: Staphylococcus epidermidis; Propioni­bac­te­rium acnes; Clostridium spp.; Corynebacterium spp.; Acinetobacter calco­ace­ti­cus; Bacillus spp. и др. Причиной сепсиса они бывают, как правило, только у больных со сниженной резистентностью.

2. Одновременное выделение из крови нескольких видов микроорганизмов чаще всего свидетельствует о загрязнении крови, но у больных со сниженной резистентностью возможна смешанная инфекция.

3. В пользу этиологической значимости выделенного микроорганизма свидетельствует его неоднократное выделение из крови или одновременное выделение из других видов исследуемого материала.

4. На этиологическую значимость выделенного микроорганизма указывает его обнаружение одновременно на разных питательных средах. Экспертами ВОЗ рекомендуется проводить дробный посев крови, когда одновременно засевается серия из нескольких флаконов с каждым видом исследуемой среды.

5. Согласно рекомендациям ВОЗ подтверждением этиологической значимости является быстрое (в течение 48 часов) обнаружение микроорганизма.

Кровь от больного сепсисом засевают в сахарный бульон и посевы инкубируют при 37°С в течение 1—3 сут. Затем производят пересев на кровяной агар для выделения чистой культуры и ее идентификации.

Заключительным этапом бактериологического исследования является идентификация выделенной культуры по биохимическим и антигенным свой­ствам.

Приложение №2

Ситуационные задачи:

Задача:

В ожоговый центр поступил больной с ожогами П-Ш степени 15% поверхности тела. После двух недель пребывания в стационаре у него начался сепсис. Посев крови больного на сахарный бульон дал придонный рост, при микроскопии которого обнаружили короткие цепочки грамположительных кокков.

Назовите предполагаемый вид выделенного микроба и предложите дополнительные исследования, которые необходимо провести, чтобы идентифицировать его вид.

Ответ:

1)стрептококки

2)Необходимо провести пересев на КА, получить чистую культуру и идентифицировать ее с помощью серологических реакций (преципитация по Ленсфильд)

Задача:

У женщины 25 лет развился послеродовой сепсис. Для назначения рационального лечения необходимо определить этиологию заболевания.

Назовите микроорганизмы, которые могут быть причиной сепсиса. Обоснуйте с микробиологических позиций выбор материала для исследования. Расскажите о правилах его взятия, транспортировки и исследования. Назовите методы микробиологической диагностики, которые позволят установить этиологию данного заболевания и назначить эффективные противомикробные химиотерапевтические препараты.

Ответ:

Наиболее вероятнее стафилококки, стрептококки, энтеробактерии

Кровь

- взятие крови (5-10 мл) целесообразно осуществлять во время лихорадочного периода,

- до начала химиотерапии или через 12-24 часа после последнего введения препарата.

Манипуляции проводят с соблюдением правил асептики.

Микробиологическое исследование крови + определение чувствительности выделенной культуры к антибиотикам.

Задача. У пожилого пациента на фоне рецидивирующего фурункулеза наблюдается резкий подъем температуры до 38,60С, озноб, тахикардия 100 ударов в минуту, лейкоцитоз 12*109/л, сдвиг лейкоцитарной формулы влево. Бактериологическое исследование крови не проводилось.

1) Поставить предварительный диагноз,

2) Продолжить лабораторное обследование больного

Ответ к задаче:

1) Предварительный диагноз – сепсис. Наиболее вероятна стафилококковая этиология заболевания.

2) Следует провести забор крови (5-10 мл) и ее посев на жидкую питательную среду (в объеме до 50-100 мл) до проведения антибиотикотерапии для бактериологического исследования. Необходимо идентифицировать культуру и определить антибиотикоустойчивость выделенного штамма.